蜀科臺(tái)式低速離心機(jī)制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞

  蜀科臺(tái)式低速離心機(jī)操作簡(jiǎn)單、運(yùn)行平衡、性能穩(wěn)定、安全可靠，廣泛應(yīng)用于，放射免疫、生物化學(xué)、食品衛(wèi)生、環(huán)保等科研領(lǐng)域。今天來(lái)科普一下如何用蜀科臺(tái)式低速離心機(jī)制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，給各位實(shí)驗(yàn)室的朋友參考。
 

1.先將受體大腸桿菌接種于LB培養(yǎng)基中活化，置于恒溫培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。。。

2.接著取一丁點(diǎn)（槍頭沾一下）上述大腸桿菌培養(yǎng)物菌落接種于3-5毫升LB試管中，于恒溫振蕩器上，37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜（約12-16 小時(shí)）。

4.再是用移液管無(wú)菌條件下，取過(guò)夜培養(yǎng)液1 毫升，接種于新鮮的LB 中（100毫升LB/250毫升三角瓶，接種量按菌液濃度而定，一般在1%左右），于恒溫振蕩器上37℃培養(yǎng)2―3 小時(shí)。

5.無(wú)菌條件下將上述1 毫升菌液倒入1.5毫升EP 管中（離心管應(yīng)帶蓋并高壓滅菌過(guò)），每組2支。

6、帶菌液的離心管置于冰上10 分鐘，冷卻菌液，平衡好，置于蜀科臺(tái)式低速離心機(jī)上，3500r/min 離心5 分鐘。

7、無(wú)菌條件下，倒去上清LB，倒斜離心管，讓LB 流干，留下沉淀菌體，加入預(yù)冷的100mmol/L CaCl2溶液600微升，用微量取樣器輕輕吸沖底部沉淀菌體，使其懸浮后，把2支管轉(zhuǎn)為1支，搖勻后于冰浴中放置30分鐘。

8、重新將CaCl2 菌懸浮液置于蜀科臺(tái)式低速離心機(jī)上，3500r/min離心10分鐘，小心側(cè)倒掉上清CaCl2 ，留沉淀菌體。

9、再把菌體懸浮在200 微升100mmol/L CaCl2 的溶液中，置于冰上作為轉(zhuǎn)化的受體菌液。此制備的感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在此步后1小時(shí)24小時(shí)內(nèi)使用，效率比較高。

10.在事先制備好的含50μg/ml Amp的LB 平板表面加40ml X-gal 儲(chǔ)液和4μl IPTG儲(chǔ)液,用無(wú)菌玻棒將溶液涂勻,置于37℃下放置3-4小時(shí),使培養(yǎng)基表面的液體*被吸收，備用。

  上面的應(yīng)用對(duì)大家有幫助嗎？操作中的蜀科TD-5Z臺(tái)式低速離心機(jī)榮獲2016“國(guó)產(chǎn)好儀器”殊榮，是國(guó)內(nèi)各大實(shí)驗(yàn)室、、生物科技、食品環(huán)保等單位*的儀器。如果您也有需要，趕快吧！